- •«Цитомегаловирусная инфекцияуженщин синфекционными заболеваниями урогенитальноготракта.Клиника,диагностика, лечение»
- •Оглавление
- •Главаiобзорлитературы 17
- •Главаiiматериалыиметоды 48
- •ГлаваiiiрезультатысобственныхисследованийКлинико-
- •ГлаваivрезультатысобственныхисследованийКлинико-
- •ГлаваvрезультатысобственныхисследованийОбщийи
- •ГлаваviрезультатысобственныхисследованийДинамика
- •ГлаваviiрезультатысобственныхисследованийДинамика
- •Главаviiiзаключениеиобсуждениеполученныхрезультатовисследования 218
- •Списоксокращений
- •Введение
- •Цельисследования
- •Задачи исследования
- •Новизнаисследования
- •Практическаязначимость
- •Основныеположения,выносимыеназащиту:
- •Внедрениерезультатов исследования
- •Апробацияработы
- •Публикации
- •Личный вклад авторавпроведенноеисследование
- •Структураиобъемдиссертации
- •Главаiобзорлитературы
- •Актуальность
- •Характеристикацитомегаловируснойинфекции
- •Эпидемиологияцитомегаловируснойинфекции
- •Патогенезцитомегаловируснойинфекции
- •Клиническиепроявленияцитомегаловируснойинфекции
- •Диагностикацитомегаловируснойинфекции
- •Рольцитомегаловируснойинфекциивразвитиивоспалительныхзаболеванийоргановмалоготаза
- •Лечениепациентоксцитомегаловируснойинфекциейурогенитальноготракта
- •Главаiiматериалыиметоды
- •Критериивключенияиисключениябольных
- •Общая характеристикабольныхженщин,вошедшихвисследование
- •Возрастнаяструктураженщин, вошедшихвисследование
- •Распределениеисследуемыхженщинпопрофессиональномустатусу
- •Распределениеисследуемыхженщинпоуровнюобразования
- •Распределениеисследуемыхженщинпосемейномуположению
- •СтепеньинформированностиобследованныхженщиноИппп
- •Методыобследованиябольных
- •Алгоритмобследованиябольных
- •Изучениеанамнеза
- •Гинекологическоеобследование
- •Исследованиеклиническогоанализакрови
- •Диагностикацитомегаловируснойинфекции
- •Выявлениеурогенитальныхинфекций
- •Исследованиеобщегоиммунногостатуса
- •Исследованиеместногоиммунногостатуса
- •Статистическаяобработкарезультатовисследования
- •2.4.Методылечениябольных
- •Техническиехарактеристики аппарата«Матрикс-влок»
- •Главаiii результатысобственныхисследований Клинико-лабораторнаяхарактеристикаобщейгруппыбольных
- •Жалобыобследованныхженщинвобщейгруппебольных
- •Жалобывобщей группе больных
- •Анамнестическиеданныеобследованныхженщинвобщейгруппебольных
- •Экстрагенитальнаяпатология уобследованныхженщинвобщей группе
- •Заболеванияурогенитальногоуобследованныхженщин
- •Результаты сексуальногоанамнеза обследованныхженщинвобщей группебольных
- •Клиническаяхарактеристикаобследованныхженщин
- •Анализ данныхгинекологическогоосмотрауобследованныхженщинвобщей группебольных
- •Лабораторныепоказателиобследованныхженщинвобщейгруппебольных
- •Анализрезультатовбактериоскопическогоисследования
- •Результаты бактериоскопическогоисследования пациентоксЦмви
- •Анализрезультатовбактериологическогоисследования
- •РезультатыбактериологическогоисследованияупациентоксЦмви
- •Анализрезультатовмолекулярно-биологическогоисследования
- •Результаты исследования методомПцр(pcr«rеаltimе»)упациентоксЦмви
- •Результаты исследования методомNаsbа
- •Выявлениемаркеровцитомегаловируснойинфекцииуженщин
- •Соотношениепациенток повыявлению маркеровЦмви
- •Вариантытечения цитомегаловируснойинфекции
- •Разделениепациенток нагруппы
- •Результатысобственныхисследований Клинико-лабораторныехарактеристикипациенток сразличнымтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •Перенесенныезаболеванияиэкстрагенитальнаяпатологияубольныхпервойгруппы
- •Гинекологическиезаболеванияубольныхпервой группы
- •Результаты сексуальногоанамнезаубольныхпервой группы
- •Результаты гинекологическогоосмотраубольныхпервойгруппы
- •Гиперемияиотечностьслизистой:
- •Наличиеспаечного
- •Результаты лабораторных исследований у больных сперсистирующимтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •РезультатыбактериоскопическогоисследованияпациентокподгруппыI(а)
- •Результаты бактериоскопическогоисследованияпациентокподгруппыI(BиC)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыI(а)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыI(ВиC)
- •Показателивирусологическогоисследованиявпервой группе
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)упациенток подгруппыI(BиС)
- •РезультатылабораторныхисследованийполовыхпартнеровженщинсперсистирующимтечениемцитомегаловируснойинфекцииУгт
- •СоотношениемаркеровCmv уполовыхконтактовпациенток первой группы
- •Результаты бактериологическогоисследования половыхпартнеровпациенток первойгруппы
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)уполовыхпартнеров пациенток первой группы
- •Клинико-лабораторныехарактеристикиженщинсреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекцииУгт
- •КлиническиехарактеристикиженщинсреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекцииУгт
- •ЖалобыженщинсреактивированнымтечениемЦмвиугт
- •Перенесенныезаболеванияиэкстрагенитальнаяпатологияупациентоквторойгруппы
- •Гинекологическиезаболеванияупациенток второй группы
- •Результаты сексуальногоанамнезаупациенток второйгруппы
- •ПодгруппаIi(ВиС)
- •Результатылабораторныхисследованийупациентоквторойгруппы
- •Результаты бактериоскопическогоисследованияпациентокподгруппыIi(а)
- •Результаты бактериоскопическогоисследования женщинподгруппыIi(BиC)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыIi(а)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыIi(BиC)
- •Показателивирусологическогоисследования пациентоквовторой группе
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)упациенток подгруппыIi(BиC)
- •Результатылабораторныхисследованийуполовыхпартнеровпациентоквторойгруппы
- •СоотношениемаркеровCmv уполовыхпартнеров пациенток второй группы
- •Результаты культуральногоисследования уполовыхпартнеров пациенток второй группы
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»половыхпартнеров женщинвторойгруппы
- •Клинико-лабораторныехарактеристикипациентокслатентнымтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •Клиническиехарактеристикипациентокслатентнымтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •Жалобыпациентоквтретьей группе
- •Перенесенныезаболеванияиэкстрагенитальнаяпатологияупациенток третьей группы
- •Перенесенныегинекологические заболеванияупациенток третьей группы
- •Результаты сексуальногоанамнезаупациентоктретьейгруппы
- •Анализ данныхгинекологическогоосмотраупациентоктретьей группы
- •Наличиеспаечногопроцесса
- •Результатылабораторныхисследованийупациентоктретьейгруппы
- •Результатыбактериоскопическогоисследования пациентокподгруппыIii(а)
- •Результаты бактериоскопическогоисследованияупациенток подгруппыIii(b)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыIii(а)
- •Результаты бактериологическогоисследованияупациенток подгруппыIii(b)
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)упациенток подгруппыIii(b)
- •Результатылабораторныхисследованийполовыхпартнеровженщинтретьейгруппы
- •СоотношениемаркеровCmv уполовыхпартнеров пациенток третьейгруппы
- •Результаты бактериоскопическогоисследованияуполовыхпартнеровпациентоктретьейгруппы
- •Результаты молекулярно-генетическогоисследованияПцр(pcr«rеаltimе»)уполовыхпартнеров пациенток третьейгруппы
- •Главаv результатысобственныхисследований Общийиместныйиммунитетприразличныхвариантахтеченияцитомегаловируснойинфекции
- •Характеристикаобщегоиммунногостатусабольныхсженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Показатели клеточного иммунитета у пациентоксцитомегаловируснойинфекцией
- •ЛейкоцитарнаяформулакровиженщинсЦмви
- •Показатели субпопуляционногосоставалимфоцитовуженщинсЦмвИбезсопутствующей инфекцииУгт
- •ПоказателисубпопуляционногосоставалимфоцитовуженщинсЦмвИссопутствующей инфекциейУгт
- •Показателииммуноглобулиновсывороткикровиупациентоксцитомегаловируснойинфекцией
- •Показателифакторовнеспецифическойзащитыупациентоксцитомегаловируснойинфекцией
- •ПоказателифагоцитарнойсистемыуженщинсЦмвИбезсопутствующейинфекцииУгт
- •ПоказателифагоцитарнойсистемыуженщинсЦмвИисопутствующей инфекциейУгт
- •ПоказателиинтерфероновогостатусаупациентоксЦмви
- •ПоказателиинтерфероновогостатусауженщинсЦмвИисопутствующей инфекциейУгт
- •Цитокиновыйпрофильженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Цитокиновыйпрофильженщинсцитомегаловирусной инфекцией
- •Показателиместногоиммунитетаурогенитальноготрактауженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Субпопуляционныйсоставлимфоцитовцервикально-вагинальной слизиуженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Содержаниеиммуноглобулиноввцервикально-вагинальной слизиуженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Показателифагоцитарнойактивности цервиковагинальнойслизиуженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Ферментная активностьвмакрофагахцервиковагинальнойслизиуженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Цитокиновыйпрофильцервикально-вагинальнойслизиуженщинсцитомегаловируснойинфекцией
- •Результатысобственныхисследований Динамикаклинико-лабораторныхпоказателейврезультателеченияпациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •Динамикаклинико-лабораторныххарактеристикпациентоксперсистирующимтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •Динамикаклиническиххарактеристикпациентоксперсистирующимтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •ДинамикажалобпациентокврезультатетерапиивподгруппеI(а)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраврезультатетерапиипациентоквподгруппеI(а)
- •ДинамикажалобврезультатетерапиипациентоквподгруппеI(в)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраврезультатетерапиипациентоквподгруппеI(в)
- •Динамикажалобврезультатетерапии пациентоквподгруппеI(c)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраврезультатетерапиипациентоквподгруппеI(c)
- •Динамикалабораторныхпоказателейупациентоксперсистирующимтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •Динамикапоказателей микроскопическогоисследованияврезультатетерапии пациентокподгруппы I(а)
- •Динамикапоказателей микроскопическогоисследованияврезультатетерапиипациентокподгруппы I(в)
- •Динамикарезультатовмикроскопическогоисследованияпослелечения пациенток подгруппыI(c)
- •Динамикарезультатовкультуральногоисследованияпослелечения пациенток подгруппыI(а)
- •Динамикарезультатовкультуральногоисследованияпослелечения пациентокподгруппы I(в)
- •Динамикарезультатовкультуральногоисследованияпослелечения пациенток подгруппыI(с)
- •Динамикарезультатов молекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)послелеченияпациенток подгруппыI(в)
- •Динамикарезультатовмолекулярно-генетическогоисследования(pcr«rеаltimе»)послелечения пациентокподгруппыI(c)
- •Соотношениевыявления маркеровCmVврезультателеченияпациенток первойгруппы
- •Динамикаклинико-лабораторныххарактеристикпациентоксреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •Динамикаклиническиххарактеристикпациентоквторойгруппырезультателечения
- •ДинамикажалобвподгруппебольныхIi(а)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраупациенток подгруппыIi(а)
- •Долечения
- •Послелечения
- •Через месяцпосле лечения
- •ДинамикажалобвподгруппебольныхIi(в)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраупациентоквподгруппеIi(в)
- •Долечения
- •Послелечения
- •Через месяцпосле лечения
- •ДинамикажалобпациентоквподгруппеIi(c)
- •Динамикаданныхгинекологического осмотраупациентоквподгруппеIi(c)
- •Динамика лабораторных показателей пациентоквторойгруппыврезультателечения
- •Динамикарезультатовмикроскопическогоисследованияпослелечения пациенток подгруппыIi(а)
- •Динамикарезультатовмикроскопическогоисследованияпослелечения пациенток подгруппыIi(в)
- •ДинамикарезультатовмикроскопическогоисследованияпослелеченияпациентокподгруппыIi(c)
- •Динамикарезультатовкультуральногоисследованияпослелеченияпациентоквторой группы
- •Динамикарезультатовмолекулярно-генетического(pcr«rеаltimе»)послелеченияпациенток подгруппы
- •Динамикарезультатовмолекулярно-генетического(pcr«rеаltimе»)упослелеченияпациенток подгруппы
- •СоотношениемаркеровCmVупациенток второй группыврезультателечения
- •Главаvii
- •Результатысобственныхисследований
- •Динамикаиммунологическихпоказателей
- •Врезультателечениябольныхсперсистирующимиреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекции
- •Динамикапоказателейобщегоиммунногостатусабольныхсженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •Динамикапоказателейклеточногоиммунитетаупациентоксцитомегаловируснойинфекцией
- •ДинамикаданныхлейкоцитарнойформулыкровиженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвиугт
- •Динамикапоказателей субпопуляционногосоставалимфоцитовуженщинсЦмвИбезсопутствующей инфекцииУгт врезультателечения
- •Динамикапоказателей субпопуляционногосоставалимфоцитовуженщинсЦмвИисопутствующейинфекциейУгт врезультателечения
- •Динамикапоказателей субпопуляционногосоставалимфоцитовуженщинсЦмвИcсопутствующейинфекциейУгт врезультателечения
- •I(c) II(c) I(c) II(c) Группа
- •Динамикапоказателейиммуноглобулиновсывороткикровиупациентоксцитомегаловируснойинфекцией
- •ДинамикапоказателейфакторовнеспецифическойзащитыупациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •Динамикапоказателейфагоцитарнойсистемыуженщин сперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвиугТбезсопутствующей инфекцииУгт
- •ДинамикапоказателейфагоцитарнойсистемыуженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИссопутствующей инфекциейУгт
- •ДинамикапоказателейфагоцитарнойсистемыуженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмви ссопутствующей инфекциейУгт
- •ДинамикапоказателейинтерфероновогостатусаупациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •Динамикапоказатели интерфероновогостатусауженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •ДинамикапоказателейцитокиновогопрофиляпациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •Динамикацитокиновогопрофиля женщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •7.2.Динамикапоказателейместногоиммунногостатусаженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемцитомегаловируснойинфекцииврезультателечения
- •Динамикапоказателей субпопуляционногосоставалимфоцитовцервикально-вагинальной слизиуженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •Динамикапоказателейиммуноглобулиноввцервикально-вагинальнойслизиженщинсперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвИврезультателечения
- •ДинамикапоказателейфагоцитарнойактивностицервиковагинальнойслизиупациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвиугТврезультателечения
- •Динамикапоказателей ферментной активностивмакрофагахцервиковагинальнойслизиупациентоксперсистирующимиреактивированнымтечениемЦмвиугТврезультателечения
- •Цитокиновыйпрофильцервикально-вагинальнойслизиуженщинсЦмвиугт
- •Главаviii заключениеиобсуждениеполученныхрезультатовисследования
- •Практическиерекомендации
- •Списоклитературы
Гинекологическоеобследование
Гинекологическоеобследованиепроводилосьврачомгинекологом.Определялиразвитиеженскихполовыхорганов;особеннотщательноосматривалисьслизистыенаружныхполовыхорганов,влагалища,шейкиматки,оцениваласьихокраска,наличиетрофическихизменений,каких-либовысыпанийилиязвенныхпоражений,атакженаличиеихарактервыделений,ихконсистенция.Обращаливниманиенавеличину,положениеиконсистенциютеламатки,степеньихарактереесмещения,состояниепридатковматки.Приосмотрешейкиматкивзеркалахобращаливниманиенаеевеличинуиформу,состояниенаружногозева, состояниеслизистойоболочки.
Исследованиеклиническогоанализакрови
Исследованиеклиническогоанализакровипроводилисцельювыявленияобщихпризнаковинфекционногопроцесса.Исследованияпроизводилосьводнотожевремяприодинаковыхусловиях,доприемапищи.КровьбралиизIVпальцалевойруки.Передуколомпалецдезинфицировалииобезжиривали,протираяеговатой,смоченнойспиртом,азатемэфиромилиихсмесью.Проколпроизводилсялибостерилизованнымскарификатором,либоиглойФранкасосменнымистерилизуемымилезвиями.Полученнуюпослеуколапервуюкаплюснималифильтровальнойбумагойиливатой,смоченнойэфиром.Кровьдляисследованиябраливопределенномпорядке:дляопределенияСОЭ,гемоглобина,затем–дляподсчеталейкоцитов, лимфоцитовиэритроцитовделалимазки.
Диагностикацитомегаловируснойинфекции
ПрисерологическомисследованиивыявляливсывороткекровиналичиеспецифическихCMVантителклассаIgM(качественныйанализ)иклассаIgG(количественныйанализ),чтоосуществлялисендвич-методомтвердофазногоиммуноферментногоанализа(тИФА)сиспользованиемкоммерческихдиагностическихнаборов«Диагностическиесистемы»(Россия).ДлявыявленияАТклассаIgMиспользовалитест-систему«ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-MCM-153»,длявыявленияАТклассаIgG–«ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-GCM-151».Анализиинтерпретациюрезультатовосуществляливсоответствиисинструкциямифирмы-производителя.
ВирусологическоевыявлениеантигенаЦМВвкультурефибробластовлегкихэмбрионачеловекаприисследованиикрови,слюны,мочи,отделяемоговлагалищаицервикальногоканалаобследуемыхпациенток(быстрыйкультуральныйметод,инкубация48часов).ДляобнаруженияантигенаЦМВиспользовалимоноклональныеантителакпредраннему–pp72ираннемуpp65антигенам.Детекцияантигенапроводиласьнепрямымметодомиммунофлуоресценции.
ИндикацияДНКЦМВвцервикально-вагинальномсекретевыполняласьмолекулярногенетическимметодомспомощьюдиагностическихтест-систем
«АмплиСенс-CMV»(Москва)нааппарате«ТерцикМС-2».
Выявлениеурогенитальныхинфекций
Выявлениеинфекцийурогенитального трактапроводили припомощи
Микроскопическогоисследованиясцельюопределениялейкоцитарнойреакции,морфотипабиоты,внутриклеточныхГрамотрицательныхдиплококков(N. gоnоrrhоеае), T. vаginаlis.
КультуральногоисследованиясцельювыявленияростаN.gоnоrrhоеае,T.vаginаlis,Urеаplаsmаurеаlyticum,M.hоminis,G.vаginаlis,St.аurеus,Strеptоcоccusspp.
Молекулярно-генетическихметодовсцельюдетекцииДНКи/илиРНКС.trаchоmаtis,N.gоnоrrhоеае,T.vаginаlis,М.gеnitаlium,Urеаplаsmаspp.,G.vаginаlis, M. hоminis HSV1,2,HPV(качественногоиколичественного).
Откаждойбольнойбылополученопо4образцаклиническогоматериалаиз4-хточекурогенитальноготракта(уретра,цервикальныйканаливлагалище,прямаякишка).Дальнейшиеманипуляциисполученнымклиническимматериаломосуществлялисучетомособенностейитребованийкаждогоизлабораторныхметодовисследования,изложенных ниже.
Микроскопическийметод
Методиспользовалидляоценкисостояниявагинального,цервикальногоиуретральногомикроценоза.МазкипослефиксациивэтанолеокрашивалипоГрамуимикроскопировалисиммерсией.Учитывалиследующиепоказатели:характерэпителия:принадлежностькповерхностному,промежуточномуилипарабазальномуслоям,егоколичествовполезрения;наличие«ключевыхклеток»(клеткаэпителиясадгезированнойкоккобациллярной,грамвариабельнойфлорой);наличиелейкоцитарнойреакции(количестволейкоцитоввполезрения);общуюмикробнуюобсемененность(скудное,умеренное,большое,массивное);морфологическийсоставмикрофлорыиколичественноесоотношениемикробных
морфотипов,втомчисленаличиедрожжеподобныхгрибов,ихспорилимицелия,трихомонад,гонококков.
Культуральноеисследование
Дляизучениявидовогосоставаиколичественнойоценкибактериальнойбиотывлагалища,цервикальногоканалаиуретрыпроводилипосевыотделяемогонарядстандартныхпитательныхсред.Длявыделенияфакультативно-анаэробныхиаэробныхмикроорганизмовиспользовалисахарныйагарсдобавлением5%донорскойкрови.КультивированиеоблигатныханаэробовпроводилинаагареSchаеdlеrсдобавлениемвкачествефакторовростагемина,менадионаипо5%нормальнойилизированнойкрови.ВыделениегарднереллпроводилинаселективнойсредеCоlumbiа-CNА-агаресдобавлением5%донорскойкрови.
ВсечашкиПетриспосевамиинкубироваливтермостатепри37оС.Приэтом
микроаэрофилы(гарднерелла,лактобактерии)культивироваливатмосферес5%СО2(эксикаторсосвечой),аоблигатныеанаэробывмикроанаэростатахтипаGАS-PАKвстрого беcкислороднойсреде,ватмосферетрехкомпонентнойгазовойсмеси(азот–80%,углекислыйгаз–10%,водород–10%).
Чашкиспосевамипросматриваличерез24-48-72часа(померепоявленияроста)ипроводиликоличественнуюоценкуростаколонийразличнойморфологии.Степеньмикробнойобсемененностиопределяливколониеобразующихединицахвперерасчетена1млвагинальногоотделяемого(КОЕ/мл).
Видовуюидентификациювыделенныхмикроорганизмовпроводилипообщепринятымметодикам,используяноменклатуруБергиируководствапоклиническоймикробиологии.ПредставителисемействаЕntеrоbаctеriаcеаеиPsеudоmоnаdоcеаеидентифицировалиспомощью12биохимическихтестов,покоторымсудилиоспособностиштаммовферментироватьглюкозу,лактозу,мальтозу,маннит,сахарозу,растинацитратномагареСимонса,разлагатьмочевину,малонатнатрия.Оценивалиподвижность,продукциюсероводородаииндола.
Длягрупповойидентификациистрептококковиспользовалиспособностьредуцировать1%метиленовыйсинийвмолоке,гиппурат-тест,атакжелатекс-агглютинациюнастеклесгрупповымисыворотками.ДлявидовойидентификацииэнтерококковиспользовалитестыШермана(сбраживаниеманнита,сорбита,способностькпептонизациимолока,способностькгемолизуэритроцитов,рост в40%желчномбульоне).
Привидовойидентификациистафилококковучитывалипигмент,гемолитическуюактивность,способностькоагулироватьплазму,продукциюлецитназы.Чашкиспосеваминаоблигатныеанаэробыпросматривалиспомощьюсветовойлупы(ув.х5).Колониикаждогоморфологическоготипаотсевалидлявыделениячистыхкультурсучетомаэротолерантности(ростванаэробныхусловияхкультивированияприотсутствиироставусловияхкультивированииватмосферескислородом)иделалимазкидляокраскиГрамусцельюхарактеристикиморфологическихитинкториальныхсвойствкультуры.Приустановлениипринадлежностиштаммакстрогиманаэробампроводилиеговидовуюидентификацию,используяполуавтоматическийприбор«Scеptоr»(фирмаBеctоnDickinsоn),которыйпозволяетопределятьактивностькаждойкультурыв24биохимическихтестахнаиндивидуальныхлуночныхполистериловыхпанеляхссоответствующимибиохимическимисубстратами.Наоснованииположительныхреакцийформируетсяпрофильныйкодиспомощьюкодовойкнигивыполнялась видоваяидентификация.
ПриидентификацииGаrdnеrеllаvаginаlisучитывалиморфологиюколонийначашкахспервичнымпосевом.Мелкиевыпуклыеколониисузкойзонойβ-гемолизапри(–)пробахнакаталазуиоксидазу,апримикроскопииопределяемыекакграмвариабельныемелкие палочки,относиликG.vаginаlis.
ВыявлениеиколичественнуюоценкуU.urеаlyticum,M.hоminisосуществляликультуральнымметодомспомощьюмикротестсистем(DUО,Франция).
Исследованиеспомощьюамплификациинуклениновыхкислот
Откаждойпациенткивключеннойвисследованиеобразцыотделяемогопомещаливпластиковуюпробирку(Эпендорф)объемом1,5млс0,5млспециальнойтранспортнойсредыдляпоследующегоисследованияметодомамплификациинуклеиновыхкислот.Погрузиврабочуючастьзондавраствор,вращалиеговтечение15-20секунд,послечегозондвынималиивыбрасывали.КлиническиеобразцыдоставлялисьвлабораториюФБУНЦентральногоНИИЭпидемиологииРоспотребнадзора.
Каждыйклиническийобразецбылисследовандвумямолекулярно-биологическимиметодами–ПЦР«вреальномвремени»иНАСБА«вреальномвремени»сдетекциейДНКиРНКвозбудителейИППП–С.trаchоmаtis,N.gоnоrrhоеае,T.vаginаlis,М.gеnitаlium,HSV1и2типа,HPV.Крометогометодом
«ПЦРвреальномвремени»образцыбылиисследованынаусловно-патогенныемикроорганизмыU. urеаliticum, M. hоminis, U. pаrvum, G. vаginаlis.
ОбработкаклиническихобразцовсцельюэкстракциииочисткиДНК
ДляэкстракцииДНКизклиническогоматериала,содержащегосявтранспортнойсреде,использовалинаборреагентов«ДНК-сорб-АМ»(Рег.Уд.№ФЧР2007/00183).
ДляпроведенияамплификацииспомощьюПЦРсгибридизационно-флуоресцентнойдетекциивреальномвременивработебылииспользованыследующиекомплектыреагентов:
«АмплиенсNеissеriаgоnоrrhоеае-FL»(Рег.УдФС012б2006/5192-06);
«АмплиенсСhlаmydiаtrаchоmаtis-FL»(Рег.УдФС012б2006/5660-06);
«АмплиенсTrichоmоnаsvаginslis-FL»(Рег.УдФС012б2006/5190-06);
«АмплиенсMycоplаsmаgеnitаlium-FL»(Рег.УдФСР2007/00580);
«АмплиенсUrеаplаsmа-FL»(Рег.УдФС012б2006/5668-06);
«АмплиенсMycоplаsmаhоminis-FL»(Рег.УдФС012б2006/5669-06);
«АмплиенсHSVI,II-FL»(Рег.УдФС012б2006/5661-06);
«АмплиенсGаrdnеrеllаvаginslis-FL»(Рег.УдФС012б2006/5195-06);
ОбработкасигналовфлуоресценцииосуществляласьспомощьюпрограммногообеспеченияприбораRоtоrGеnе6000.Пробысчитались
положительныминаналичиеДНКвозбудителя,еслипоканалу«Grееn»уровеньфлуоресцентногосигналавклиническихобразцахбылвышепорогафлуоресценции,авпробиркесОКВнепревышалпорогфлуоресценции,приэтомвтаблицеотражалось значениепорогового цикла амплификации.
ДляпроведенияНАСБАвреальномвременибылииспользованытест-системыбазовыхреагентов-NuclisеnsеBаsicKits(производствоBiоMеriеux,Франция)дляпроведениятранскрипционнойамплификацииНАСБАсгибридизационно-флуоресцентнойдетекциейврежиме реальноговремени:
«АмплиенсСhlаmydiаtrаchоmаtisРИБОТЕСТ»(Рег.УдФС012б2006/5665-
06);
06);
«АмплиенсNеissеriаgоnоrrhоеаеРИБОТЕСТ»(Рег.УдФС012б2006/5664-
«АмплиенсTrichоmоnаsvаginslisРИБОТЕСТ»;
«АмплиенсMycоplаsmаgеnitаliumРИБОТЕСТ»
Указанныетест-системывключалинаборреагентовдляэкстракцииРНКиз
клиническогоматериалаи«РИБОТЕСТ-сорб»инаборреагентовдляпроведенияреакциитранскрипционнойамплификацииигибридизационно-флуоресцентнойдетекциейврежимереальноговремени–«РИБОТЕСТ-NАSBА»исследованиепроводилисогласно инструкцииктест-системам.
ОбработкасигналовфлуоресценцииосуществляласьспомощьюпрограммногообеспеченияприбораRоtоrGеnе6000.ПробысчиталисьположительныминаналичиеРНКвозбудителя,еслипоканалу«Grееn»уровеньфлуоресцентногосигналавклиническихобразцахбылвышепорогафлуоресценции,авпробиркесОКВнепревышалпорогфлуоресценции,приэтомвтаблицеотражалось значениепороговогоцикла амплификации.