- •Оглавление
- •РАЗДЕЛ 1. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ НИЗШИХ ОРГАНИЗМОВ
- •Задание 1.1.1. Выделение плазмидной ДНК
- •Задание 1.2.2. Трансформация клеток E. сoli электропорацией
- •Задание 1.5.1. Приготовление смесей дНТФ/Cy5 ддНТФ
- •Задание 1.5.2. Постановка реакции
- •Задание 1.5.3. Осаждение и нанесение образцов на гель
- •Задание 1.5.4. Заливка геля и постановка электрофореза
- •Задание 1.5.5. Анализ сиквенсов
- •Задание 1.6.1. Выделение ДНК из биомассы водорослей
- •Задание 1.6.3. Проведение секвенирования
- •Задание 1.6.4. Анализ полученных данных
- •РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
- •Задание 2.2.1. Проведение электрофореза выделенной ДНК в агарозном геле
- •Задание 2.2.4. Определение концентрации ДНК с помощью спектрофотометра
- •Задание 2.3.2. Разделение амплифицированных фрагментов ДНК с помощью электрофореза
- •Порядок выполнения работы
- •РАЗДЕЛ 3. БИОЛОГИЯ КЛЕТКИ В КУЛЬТУРЕ. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ И ТКАНЕВОЙ ИНЖЕНЕРИИ
- •Задание 3.5.1 Приготовление питательной среды
- •Задание 3.6.3. Посев клеток на материалах
- •Задание 3.6.5. Подсчет клеток
- •Задание 3.6.6. Процесс трипсинизации клеток
- •Задание 3.8.1. Освоение техники субкультивирования клеток
- •Задание 3.8.2. Замораживание прикрепленных клеток
- •РАЗДЕЛ 4. КУЛЬТУРА РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ. Технология микроклонального размножения растений
- •Задание 4.3.1. Выделение и культивирование апикальных меристем картофеля
- •РАЗДЕЛ 5. МЕТОДЫ И АППАРАТУРА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
- •Задание 5.6.1. Определение показателей роста и спорообразования грибных культур поверхностным и глубинным способом
- •Задание 5.8.1. Освоить методы культивирования микроводорослей
- •РАЗДЕЛ 6. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МАКРОМОЛЕКУЛ И МЕТАБОЛИТОВ
- •Задание 6.10.1. Снятие ИК-спектра полигидроксибутирата
- •РАЗДЕЛ 7. ОПТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ
- •Задание 7.1.1. Приготовление образцов для исследования.
- •Задание 7.2.1. Приготовление образцов для исследования.
- •Задание 7.2.3. Проверка светорассеяния в исследуемых образцах
- •Составление отчета
- •4. Составление отчета.
- •Задание 7.4.1. Приготовление образцов для исследования.
- •Задание 7.4.2. Исследование спектров люминесценции.
- •Задание 7.5.1. Оценить численность микроорганизмов в водных образцах
- •РАЗДЕЛ 8. ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ СОСТОЯНИЯ ФОТОСИТЕЗИРУЮЩИХ ОРГАНИЗМОВ
- •РАЗДЕЛ 9. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КИНЕТИКИ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ
- •Задание 9.1.3. Определение константы Михаэлиса. Специфичность
- •Задание 9.2.2. Определение типов взаимодействия эффекторов с ферментом по отношению к субстрату
- •РАЗДЕЛ 10. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
- •Задание 10.3.1. Выделение ДНК из биопроб
- •Задание 10.5.1. Построение абсолютного калибровочного графика зависимости концентрации глюкозы в пробе от изменений оптической плотности
- •Задание 10.7.1. Исследование образца крови на анализаторе МЕК-6400J/К
- •РАЗДЕЛ 11. БИОФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ СОСТОЯНИЯ ОБЪЕКТОВ ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ
- •Задание 11.4.1. Ознакомление с метордом автоматической фотоколориметрии
- •РЕКОМЕНДОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
- •РАЗДЕЛ 1
- •РАЗДЕЛ 2
- •РАЗДЕЛ 3
- •РАЗДЕЛ 4
- •РАЗДЕЛ 5
- •РАЗДЕЛ 6
- •РАЗДЕЛ 7
- •РАЗДЕЛ 8
- •РАЗДЕЛ 9
- •РАЗДЕЛ 10
- •РАЗДЕЛ 11
- •Приложение. Перечень научного оборудования, использованного в лабораторном практикуме
РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
|
|
|
Таблица 2.7 |
||
|
|
|
|
|
|
Шаг |
Функция |
Температура, |
Длительность, |
Число |
|
°С |
мин |
циклов |
|||
|
|
||||
Начальная де- |
Денатурация |
94 |
2 |
1 |
|
натурация |
|||||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
Денатурация |
94 |
1мин |
|
|
|
|
|
|
40 |
|
Амплификация |
Отжиг |
59 |
1мин |
||
Синтез |
72 |
2 мин |
|
||
|
|
||||
Завершающий |
Синтез |
72 |
10 мин |
|
|
синтез |
(элогация це- |
|
|||
пи) |
|
|
|
||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
Хранение* |
Хранение |
4 |
Неопределенное |
1 |
Задание 2.4.2. Анализ продуктов ПЦР спомощью гель- электрофореза
Порядок выполнения работы
1.Приготовить 1 %-й гель агарозы и аппарат для гель-электрофореза согласно протоколу из работы 2.1 Задание 2.1.1. Гель приготовить без бромистого этидия.
2.Пробирки после ПЦР отцентрифугировать (пульс-режим).
3.В каждую пробирку внести по 10 мкл раствора красителя Orange G, тщательно перемешать на вортексе.
4.В лунки геля поместить по 20 мкл образцов в следующем порядке (см. табл. 2.8).
5.Провести электрофорез на агарозном геле в течение 30 мин при напряжении 100 В.
6.Зафиксировать результат на системе видеодокументации и проанализировать полученные результаты. Заполнить табл. 2.9.
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
106 |
РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
|
|
|
|
|
Таблица 2.8 |
|
|
|
|
|
|
№ лунки |
образец |
|
|||
1 |
|
«non-ГМО» образец, растительный праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
2 |
|
«non-ГМО» образец, ГМО-праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
3 |
|
«тест» образец, растительный праймер |
|||
4 |
|
«тест» образец, ГМО-праймер |
|
||
5 |
|
«+ГМО» образец, растительной праймер |
|||
|
|
|
|
|
|
6 |
|
«+ГМО» образец ГМО-праймер |
|
||
7 |
|
Набор стандартов мол. массы 100 bp |
|||
|
|
|
|
|
Таблица 2.9 |
|
|
|
|
|
|
№ полосы |
|
Нанесенный образец |
Наличие |
|
Размер |
|
полос |
|
фрагментов |
||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
1 |
|
«non-ГМО» образец, расти- |
|
|
|
|
тельный праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
«non-ГМО» образец, ГМО- |
|
|
|
|
праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
«тест» образец, раститель- |
|
|
|
|
ный праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
|
тест» образец, ГМО-праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
«+ГМО» образец, раститель- |
|
|
|
|
ной праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
|
«+ГМО» образец ГМО- |
|
|
|
|
праймер |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
7 |
|
Стандарты мол. массы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контрольные вопросы
1.Какие методы анализируют анонимный полиморфизм ДНК? Какие принципы положены в их основу?
2.Назовите достоинства и недостатки использования RAPD- и ISSRме-
тодов.
3.Какие участки ДНК амплифицируются при проведении RAPD- и ISSRанализов?
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
107 |
РАЗДЕЛ 2. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
РАБОТА 2.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИСУТСТВИЯ ГМО В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ МЕТОДОМ ПЦР
4.Какие требования предъявляются к праймерам, используемым для создания RAPD- и ISSR-маркеров?
5.Назовите последовательность основных этапов работ при проведении RAPD- и ISSR-анализов.
6.Каким образом анализируется матрица фенетических признаков?
7.Что называют ГМО? Как вы относитесь к проблеме их распростране-
ния?
8.Возможно ли создание единой методики ПЦР с одинаковыми праймерами для определения всех видов ГМО?
|
Современные аппаратура и методы исследования биологических систем. Большой практикум. Учебебное пособие |
108 |