3 курс / Фармакология / Диссертация_Горбунова_Ю_В_Психотропная_и_нейропротективная_активность
.pdf131
Таким образом, курсовое 14-ти дневное введение соединения VMA-10- 18 животным, с хроническим НМК, приводило к улучшению координации движений, мышечной силы, мелкой моторики и сенсорной чувствительности,
по сравнению с показателями группы контроль-ишемия и сопоставимы с показателями животных, получавших глиатилин.
Влияние курсового введения соединения VMA-10-18 на поведение животных с ХНМК в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».
Возникновение депрессии у больных с цереброваскулярными заболеваниями считается неврологической проблемой и встречается более,
чем у 20% пациентов, перенесших острые или хронические НМК.
Современные принципы лечения тревожно-депрессивных расстройств при хронической ишемии головного мозга включают в себя большой спектр медикаментозных препаратов, таких, как нейрометаболические и нейпропротективные средства, антидепрессанты и транквилизаторы. Но,
несмотря на многообразие используемых препаратов в лечении аффективных расстройств при ХНМК ни один из этих препаратов полностью не удовлетворяет требованиям врачей и пациентов. Поэтому разработка соединения для лечения и профилактики ХНМК, чьим дополнительным
(плеойтропным) эффектом будет уменьшение тревожно-депрессивных расстройств, актуальна и перспективна. При изучении нейропсихотропных эффектов соединения VMA-10-18 было установлено, что оно обладает антидепрессивными свойствами, поэтому мы посчитали целесообразным изучить антидепрессивное действие у животных с ХНМК, для чего и было оценено поведение животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».
У животных с ХНМК, получавших 2% крахмальный гель, на 7 и 14 дни
«лечения» в тесте «Порсольт» были отмечены признаки тревожно-
депрессивного поведения (Таблица 56), о чем свидетельствовало увеличение
132
времени иммобилизации, снижение времени активного плавания и количества совершенных животными прыжков. Курсовое введение соединения VMA-10- 18 способствовало уменьшению времени иммобилизации, при этом животные данной группы выполняли большее количество прыжков, что свидетельствует об антидепрессивном действии у соединения VMA-10-18. Препарат сравнения глиатилин не влиял на показатели животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту».
Таблица 56 - Влияние соединения VMA-10-18 на поведение животных в тесте «Принудительного плавания по Порсольту» у животных с ХНМК
Группы / |
|
ЛО |
Контроль- |
VMA-10-18 |
Глиатилин |
|
показатели |
|
ишемия |
5 мг/кг |
|||
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
ЛП двигательной |
|
7 дней |
8,5±1,70 |
1,8±0,30* |
3,0±0,60 |
1,4±0,30 |
активности, с. |
|
|
|
|
|
|
|
14 дней |
2,2±0,40 |
2,7±0,50 |
1,4±0,40 |
2,3±0,70 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Время |
|
7 дней |
9,8±2,30 |
18,8±3,30* |
9,6±1,50# |
21,8±4,30 |
иммобилизации, с. |
|
|
|
|
|
|
|
14 дней |
13,5±1,50 |
22,8±2,50* |
12,0±1,78# |
24,8±6,10 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Количество |
|
7 дней |
4,7±0,60 |
2,2±0,40* |
10,4±1,60# |
3,4±0,90 |
прыжков |
|
|
|
|
|
|
|
14 дней |
6,7±1,20 |
2,8±0,60* |
6,4±1,20 |
3,8±0,50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Время активного |
|
7 дней |
245,0±6,90 |
188,3±16,3 |
188,8±21,50 |
218,2±14,50 |
плавания |
|
|
|
|
|
|
|
14 дней |
203,6±19,40 |
187,4±19,5 |
153,7±10,10 |
182,9±12,60 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
Таким образом, при моделировании ХНМК у животных наблюдались признаки депрессивных наслоений (сокращение латентного периода двигательной активности, увеличение времени иммобилизации, уменьшение времени активного плавания и количества совершенных прыжков). При курсовом применении соединение VMA-10-18 оказывало антидепрессивное действие, вызывая статистически значимые изменения специфических показателей: уменьшение продолжительности иммобилизации, повышение количества прыжков. Препарат сравнения глиатилин не оказывал значимого влияния на животных в тесте принудительного плавания по Порсольту.
Выявленный антидепрессивный эффект у соединения VMA-10-18 в условиях ишемии и расширяет терапевтический потенциал его применения у больных с НМК, имеющих тревожно-депрессивные расстройства.
133
Оценка когнитивной функции в тестах УРПИ и ТЭИ у животных с ХНМК, получавших VMA-10-18 и глиатилин
НМК сопряжены с ухудшением когнитивных функций, в частности затруднениями формирования памятного следа и его воспроизведения. Для изучения сохранности памятного следа были использованы тесты УРПИ и ТЭИ, в которых обучение (формирование памятного следа) осуществляли на
7 и 14 дни после формирования ХНМК до введения исследуемых веществ.
В результате обучения и первого тестирования установлено, что животные с ХНМК чаще и быстрее, после помещения в установку заходили в темный отсек (УРПИ), а также значимо дольше по времени решали задачу экстраполяционного избавления (ТЭИ), что свидетельствует о снижении когнитивных функций у стресированных животных.
Через 21 и 28 дней после моделирования ХНМК (на 7 и 14 день после введения соединения VMA-10-18 или препарат сравнения) животные,
получавшие соединение VMA-10-18, в тесте УРПИ – совершали меньшее количество заходов в темный отсек, при этом у животных зашедших в темный отсек латентный период захода был значительно больше, чем у животных группы негативного контроля (Таблица 57).
Таблица 57 - Влияние соединения VMA-10-18 на поведение в тесте «Условная реакция пассивного избегания» животных с ХНМК
|
|
|
Время после начала введения веществ |
||||
Показатели |
Количество |
Доза, |
|
|
|
|
|
на 7 день «лечения» |
14 день «лечения» |
||||||
/ группы |
животных |
мг/кг |
|
|
|
|
|
ЛП захода, с |
% не |
ЛП захода, с |
% не |
||||
|
|
|
|||||
|
|
|
зашедших |
зашедших |
|||
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
ЛО |
12 |
- |
180,0±0,00 |
100 |
180,0±0,00 |
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Контроль- |
12 |
- |
|
|
|
|
|
ишемия |
|
122,5±20,60* |
58 |
95,7±22,60* |
42 |
||
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
ОСМА+ |
12 |
5 |
173,3±4,50# |
83 |
153,3±17,90# |
83 |
|
VMA-10-18 |
|||||||
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
Глиатилин |
12 |
100 |
165,8±14,20# |
92 |
154,9±16,30 |
75 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Примечание: ЛП захода – латентный период захода животного в темный отсек в тесте УРПИ (с); *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
134
В тесте ТЭИ животные, получавшие соединение VMA-10-18, быстрее решали задачу экстраполяционного избавления, что свидетельствует о сохранении памятного следа у животных с экспериментальным НМК,
получавших соединение VMA-10-18 (Таблица 58). Таким образом,
представленные данные свидетельствуют о том, что соединение VMA-10-18 у
животных с ХНМК улучшало когнитивные функции. Для уточнения и расширения данных о влиянии его на обучение и память было проведено исследование в тесте «Барнс».
Таблица 58 – Влияние соединения VMA-10-18 на поведение в «тесте экстраполяционного избавления» животных с ХНМК
|
|
Время после начала введения веществ |
||
Показатели / |
Доза, |
|
|
|
на 7 день «лечения» |
14 день «лечения» |
|||
группы |
мг/кг |
|||
|
|
|||
ЛП подныривания, с |
ЛП подныривания, с |
|||
|
|
|||
|
|
|
|
|
ЛО |
- |
6,3±1,00 |
4,6±0,50 |
|
Контроль-ишемия |
- |
20,0±3,10 |
14,1±0,90 |
|
ОСМА+ VMA-10-18 |
5 |
9,7±2,30# |
5,2±0,80# |
|
|
|
|
|
|
Глиатилин |
100 |
9,6±1,30# |
4,5±0,60# |
Примечание: ЛП - латентный период подныривания; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
Влияние курсового введения соединения VMA-10-18 на формирование референтной пространственной памяти животных с хроническим НМК в тесте Барнс
Референтную пространственную память животных с ХНМК исследовали в лабиринте Барнс на 14 день после моделирования ишемии.
Животные группы контроль-ишемия и группы ЛО получали за 60 мин. до теста 2% крахмальный гель, опытные группы – соединение VMA-10-18 или препарат сравнения. На 14-й и 15-й день проводили обучение в тесте и далее на 21-й и 28-й день (на 7 и 14 день лечения) воспроизведение теста.
135
Рисунок 7. Количество ошибок, совершенных животными с ХНМК в тесте Барнс (через 21 и 28 дней после моделирования ХНМК), получавших с 15 по 28 день соединение VMA-10-18
Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
При тестировании (Рисунок 7) через 7 и 14 дней после введения веществ
(что соответствует 21-му и 28-му дню течения ХНМК), животные группы контроль-ишемия совершали большее число ошибок референтной
(долговременной) памяти по сравнению с ЛО, что может свидетельствовать о большем ишемическом повреждении головного мозга, что проявлялось в ослаблении у них внимания, зрительно-пространственной ориентации.
Напротив, при курсовом применении соединение VMA-10-18 у крыс с НМК уменьшало выраженность когнитивных нарушений, что подтверждалось в меньшем количестве ошибок и лучшей пространственной ориентации животных в лабиринте по сравнению с показателями крыс, получавших 2%
крахмальный гель.
5.2.3. Изучение влияния курсового введения соединения VMA-10-18 на уровень кровотока в сонных артериях и в проекции средней мозговой
артерии
Степень тяжести неврологических нарушений в условиях церебральной ишемии в значительной степени зависит от кровообращения мозга. Поэтому мозговой кровоток (МК) можно расценивать как интегральный показатель,
136
снижение уровня которого коррелирует с выраженностью психоневрологических отклонений.
Для нормальной работы головного мозга требуется большое количество энергии. Питательные вещества и кислород доставляются в клетки нервной ткани с кровотоком, который поступает через четыре мощные магистральные артерии: две сонные и две позвоночные. У основания мозга ветви этих сосудов образуют замкнутый круг, названный виллизиевым. Значительный стеноз сонных артерий снижает объем поступающей крови к головному мозгу, и,
вследствие этого, доставку кислорода и питательных веществ.
На первом этапе была проведена оценка сохранности кровотока в сонных артериях у крыс с ХНМК. Исходные показатели кровотока по ОСА у крыс были сопоставимы, во время проведения операции по моделированию ХНМК мы добивались снижения уровня кровотока по ОСА в среднем на 50-
60%, а в головном мозге (в проекции средней мозговой артерии) – на 40-45%
от изначальных значений (Рисунок 8).
Рисунок 8. Уровень кровотока в общих сонных артерий у животных с ХМНК
Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы (критерий Дана).
Через 28 дней после моделирования ХНМК было отмечено, что уровень кровотока в ОСА у крыс группы контроль-ишемия в среднем оставался ниже на 33-36%, чем у ЛО животных. У животных, получавших в течение 14 дней
137
соединение VMA-10-18, кровоток в ОСА был выше, чем у животных группы контроль-ишемия, но эти различия не достигали статистической значимости.
При оценке уровня МК установлено, что у животных с хроническим НМК он был на 34% ниже, чем у ЛО животных (Рисунок 9). Курсовое 14-ти дневное введение соединения VMA-10-18 улучшало мозговое кровообращение у крыс, повышая его уровень на 20-25% по сравнению с животными с ХНМК, получавшими 2% крахмальный гель.
Рисунок 9. Уровень МК в проекции средней мозговой артерий у животных с ХНМК
Примечание: * - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
Введение соединения VMA-10-18, а также препарата сравнения глиатилина не оказывало значимого влияния на уровень МК в проекции средней мозговой артерии крыс с ХНМК.
5.2.4. Изучение влияния курсового введения наиболее соединения VMA- 10-18 на функциональное состояние эндотелия крыс с ХНМК
Литературные данные последних лет, со всей очевидностью,
свидетельствуют о том, что эндотелиальная дисфункция (ЭД) лежит в основе цереброваскулярной патологии [Рябченко А.Ю., 2014]. Эндотелий играет ключевую роль в регулировании сосудистого тонуса за счет продукции вазоактивных веществ, наиболее важным из которых является оксид азота –
«маэстро», управляющий продукцией всех эндотелиальных факторов. ЭД
138
проявляется в первую очередь нарушением эндотелиозависимой вазодилатации, которую в условиях эксперимента, возможно оценить по степени изменения показателей мозгового кровотока при введении модификаторов синтеза эндогенного оксида азота.
Поэтому изучение функционального состояния эндотелиальной системы мозговых сосудов в постишемический период у животных, курсом принимавших соединение VMA-10-18, позволит оценить один из возможных
аспектов его церебропротекторного действия.
Вазодилатирующая функция эндотелия была оценена в условиях
модификации синтеза эндогенного NO при введении ацетилхолина
(активатора eNOS) и нитро-L-аргинина (ингибитора eNOS).
В ходе исследования было установлено, что у животных с ХНМК наблюдалась статистически менее значимая реакция на введение ацетилхолина (Рисунок 10А) и нитро-L-аргинина (Рисунок 10Б), чем у ЛО животных, тогда как реакция эндотелий независимая на нитроглицерин во
всех экспериментальных группах практически не отличалась.
А Б
Рисунок 10. Изменение мозгового кровотока (%) в проекции средней мозговой артерии при введении ацетилхолина (А), нитро-L-аргинина (Б) у животных с ХНМК
Примечание: *- р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю ЛО группы; # - р<0,05– различия статистически значимы по отношению к показателю группы контроль-ишемия (критерий Дана).
Введение ацетилхолина животным с ХНМК, получавших соединение VMA- 10-18, вызывало увеличение кровотока на 157%, чем у группы контроль-ишемия.
(Рисунок 10А). У животных группы препарата сравнения – глиатилин на 7,4%.
139
Блокада синтеза оксида азота введением нитро-L-аргинина данным животным способствовала более выраженному снижению церебрального кровотока по сравнению с животными с ХНМК без лечения (Рисунок 10Б). Полученные результаты свидетельствуют о том, что под действием соединения VMA-10-18 у
животных с ХНМК увеличивается стимулируемая и базальная продукция оксида азота.
Таким образом, по влиянию на функциональное состояние эндотелия мозговых сосудов более выраженным действием обладает соединение VMA-10-18.
5.2.5. Изучение влияния соединения VMA-10-18 на утилизацию глюкозы мозгом при ХНМК
Ишемизированная ткань мозга испытывает энергодефицит, более того, в
результате снижения аэробного окисления глюкозы в ней развивается лактат-
ацидоз, что приводит к дальнейшему каскаду нарушений клеточного метаболизма.
Вещества, увеличивающие потребление глюкозы мозгом, уменьшают повреждение ишемизированной нервной ткани. В связи с чем было изучено влияния соединения
VMA-10-18 и препарата сравнения глиатилина на метаболизм глюкозы в ткани ишемизированного мозга у животных с ХНМК.
Было установлено, что соединение VMA-10-18 статистически значимо увеличивает утилизацию глюкозы мозгом у животных с ХНМК (Рисунок 11).
Рисунок 11. Влияние соединения VMA-10-18 и глиатилина на утилизацию глюкозы мозгом у животных с хронической ишемией головного мозга
Примечание: * - р<0,05 - различия статистически значимы по отношению к группе -ЛО животных; # - р<0,05 - различия статистически значимы по отношению к группе животных контроль-ишемия (критерий Дана).
140
Среди различных форм НМК по распространенности одно из первых мест занимает хроническая цереброваскулярная недостаточность. Хроническая ишемия мозга – особая разновидность сосудистой церебральной патологии, обусловленная медленно прогрессирующим диффузным нарушением кровоснабжения головного мозга с постепенно нарастающими разнообразными дефектами его функционирования. За последние 10 лет, по данным Министерства здравоохранения РФ, число больных с хроническими формами нарушения МК выросло. Развитие и прогрессирование ХНМК в клинической практике зачастую сопровождаются эмоциональными нарушениями у больных с преобладанием тревожных и депрессивных компонентов. Их наличие снижает приверженность пациентов к терапии, негативно влияет на эффективность проводимых лечебных и профилактических мероприятий. Вместе с тем коррекция указанных нарушений нередко осложнена тем, что пациенты с ХНМК вынуждены одновременно принимать несколько лекарственных препаратов с риском развития нежелательного лекарственного взаимодействия. Поэтому наличие у нейропротекторного средства (анксиолитических и антидепрессивных свойств)
позволит снизить риск полипрагмазии и повысит эффективность проводимой терапии. Проведенное исследование позволило установить, что соединение VMA- 10-18 способно снижать выраженность эндотелиальной дисфункции и улучшать мозговое кровообращение, очевидно это обуславливает снижение выраженности когнитивного нарушения. Соединение VMA-10-18 в условиях ХНМК оказывало анксиолитическое действие, что будет несомненно полезным при его применении у лиц с НМК, имеющих тревожно-депрессивные наслоения.