6 курс / Судебная медицина / Судебно_медицинская_экспертиза_отравлений_антихолинэстеразными_веществами
.pdfОбнаружена высокая активность холинэстеразы в чувствительных и моторных нервных волокнах, а также в тельцах Мейснера и колбах Краузе. Много холинэсте разы было найдено в клетках каротидного клубка арте- рио-венозных анастомозов, в симпатическом ганглии и в ядрах глии коры больших полушарий головного моз га. Кроме того, истинная холинэстераза была выявлена в моторных бляшках скелетной мускулатуры и в клетках гладких мышц стенки желудочно-кишечного тракта, мо чевого пузыря и бронхов (В. В. Португалов и В. А. Яков лев, 1953; Coers, 1954).
В миокарде (Gerebtzoff, 1953; Gotte, 1955; Е. И. Ильи- на-Какуева, 1958) истинная холинэстераза локализуется в нервных тканях вблизи ганглиозных клеток, внутри постганглионарных волокон и в проводящей системе; в обычных мышечных волокнах истинная холинэстераза не обнаружена. Ложная холинэстераза в нервной ткани миокарда не найдена; в проводящей системе ее мало.
В тканях стенок артерий (в том числе в стенках аор ты) больше всего содержится ложной холинэстеразы. В ткани надпочечников истинная холинэстераза сосредото чена в нервных волокнах коркового слоя; мозговое ве щество содержит фермент в виде зернистой сетки. Ак тивность холинэстеразы вилочковой железы низка, а с возрастом еще более снижается. Холинэстераза в мы шечных волокнах щитовидной железы обнаруживается главным образом в местах контакта волокон с желези стой тканью. Слюнные железы также содержат специ фическую холинэстеразу, которая распределяется в нерв ных стволах, в ядрах и цитоплазме, внутри междолевых протоков.
В цитоплазме мегакариоцитов костного мозга и селе зенки крысы, мыши и кошки найдено значительное, но варьирующее содержание холинэстеразы. Обнаружен фермент в ростковых центрах фолликулов и эндотелии капилляров. И. С. Гавриленко (1959) установила, что наи большая активность истинной холинэстеразы в лимфаденоидной ткани определяется в мало-и недифференци рованных клеточных элементах: лимфобластах, больших и средних лимфоцитах, ретикулярных и адвентициальных клетках, в эндотелии капилляров и сосудов. Значитель ное количество фермента имеется в шванновской оболоч ке нервных стволов.
70
Распределение холинэстеразы в поджелудочной желе зе разных животных неодинаково. У собак и морских свинок фермент локализуется в дольках и в просвете ка нальцев; в стенках канальцев и в клетках Лангерганса холинэстераза не обнаружена. У кроликов, крыс и овец фермент найден в периваскулярных элементах: он изо лирован или сгруппирован в небольшие пучки вокруг маленьких артерий и артериол, соответственно их холинергической иннервации.
Исследования активности холинэстеразы головного мозга проводились преимущественно на кошках и кры сах (G. Koelle, I950, 1953, 1963). Наибольшее количество холинэстеразы было обнаружено в моторных нейронах моторных ядер головного мозга, в преганглионарных во локнах автономной системы (включая латеральные спинальные рога и ядра Эдингера — Вестфаля), в нейронах ретикулярной формации; в некоторых четвертичных аф ферентных волокнах латеральных таламических ядер). В гипоталамической области истинная холинэстераза оп ределяется в некоторых клетках супраоптикальной обла сти, в ядрах паравентрикулярной области и над пере крестом зрительных путей.
Внебольшом количестве и непостоянно истинная хо линэстераза выявляется в нейронах некоторых корреля тивных центров, а также в нейронах, соединяющих мо торную кору с большими клетками красного ядра.
Вбольшинстве клеток фермент располагается в кле точных мембранах и продолжается в дендритах и аксо нах. В центральной нервной системе, кроме истинной холинэстеразы, содержится большое количество ложной холинэстеразы. Псевдохолинэстераза присутствует глав ным образом в проводящих путях белого вещества (Ord
иThompson, 1952) и локализуется в глиальных клетках. Кроме того, ложный фермент обнаруживается вокруг супраоптического ядра IV желудочка в районе паравентрикулярного ядра. Капилляры и другие кровеносные
сосуды головного и спинного мозга, как и большинст во сосудов других органов, также содержат холинэстеразу.
Гистохимические исследования спинного мозга (Giacobini, Holmstedt, 1958; W. Koelle и G. Koelle, 1959) по казывают, что только передние и латеральные рога дают положительную реакцию на истинную холинэстеразу.
7)
Большие моторные нейроны сильно окрашиваются. Спинной мозг содержит также и ложную холинэстеразу.
Установлено, что в коре головного мозга межклеточ ное вещество глии содержит большое количество холин эстеразы, в мозжечке — в клетках-зернах, вокруг клеток Пуркинье, в двигательных нейронах и нервных волокнах серого вещества.
Распределение холинэстеразы в ганглиях оценивает ся различно. В первоначальных исследованиях на кошках высокая концентрация истинной холинэстеразы была найдена в холинергических нейронах, в то время как в адренергических и сенсорных волокнах фермент не обнаружен. Впоследствии оказалось, что все нервы верх него шейного симпатического ганглия кроликов содержат различное количество истинной холинэстеразы (W. Koel le и G. Koelle, 1959). Дальнейшие исследование Koelle (1959, 1963) на кошках, кроликах и обезьянах показали присутствие истинной холинэстеразы в большинстве ти пов периферических нейронов. В холинергических нейро нах концентрация энзима постоянно высока; в адренер гических и сенсорных типах нейронов холинэстеразы мало. Нейроны ауэрбаховского сплетения и скопления интерстициальных клеток содержат высокую концентрацию ложной холинэстеразы (W. Koelle и G. Koelle, 1959).
В полосатом теле содержится до 95% истинной холин эстеразы и 5% ложного фермента.
Giacobini (1959) нашел, что активность холинэстера зы широко варьирует не только среди клеток различных типов, но и в отдельных клетках одного типа. Активность истинной холинэстеразы в клетках передних рогов в 3—20 раз выше, чем в клетках парасимпатического ганг лия, в 10—20 раз выше, чем в клетках симпатического ганглия, и в 30—70 раз выше, чем в клетках спинального ганглия. Активность фермента варьирует как в теле клет ки, так и в аксонах. Ложная холинэстераза найдена в не большом количестве в некоторых клетках спинального и симпатического ганглиев. Активность дендритов не сколько ниже, а активность ядер в 10—100 раз ниже дру гих частей клеток: в ядрышках энзим совсем не опреде ляется. По данным автора, в клетках глии содержится только ложная холинэстераза.
Использование специфических субстратов и ингиби торов показывает, что истинная холинэстераза присутст-
72
вует в некоторых из клеток симпатических, парасимпати ческих и спинальных ганглиев и во всех клетках перед них рогов.
Из фармакологических исследований вытекает, что
истинная |
холинэстераза локализуется |
как внутри, так |
и снаружи |
клеточных мембран (Koelle |
и Steiner, 1956). |
В литературе имеются отрывочные сведения о состоя нии холинэстеразы органов и тканей человека. Наиболее полные данные, характеризующие уровень холинэстеразной активности головного мозга человека, имеются в сводке Ord и Thompson (1952) (табл. 10).
A. JX Мельникова (1965, 1967), используя гистохими ческий метод, нашла, что в сердце человека наибольшей холинэстеразной активностью обладают интрамуральные нервные ганглии, располагающиеся в области передней и задней стенок правого предсердия, а также нервные про водники. Обнаружена богатая сеть холинергических воло кон в субэндокардиалыюм слое и в самом эндокарде. При инфаркте миокарда в начальном периоде его разви-
73
тия изменения активности холинэстеразы касаются преж де всего нервных ганглиев: резкое снижение активности холинэстеразы в одних узлах на фоне почти нормальной активности фермента в других узлах. По мере развития морфологической картины инфаркта активность холин эстеразы восстанавливается, свидетельствуя о возмож ной стадии компенсации. При рубцевании инфаркта холинэстеразная активность нервных ганглиев полностью возвращается к норме. В случае гипертрофии миокарда в субэндокардиальном слое определяется слой мышеч ных волокон, обладающих повышенной холинэстеразной активностью.
Мы поставили пред собой задачу установить уровень активности холинэстеразы органов и тканей человека в норме и при некоторых встречающихся отравлениях (Я. С. Смусин, 1962—1965).
Если можно говорить об активности холинэстеразы крови человека в норме, т. е. у живых, практически здо ровых людей, то, естественно, весьма затруднительно или невозможно установить норму холинэстеразной активно сти органов и тканей трупов. Судить об уровне холинэсте разной активности органов и тканей трупов людей можно лишь путем сравнения активности при некоторых видах смерти. Трудно сказать, что следует принять за норму. По-видимому, наиболее целесообразно брать такие слу чаи смерти, в которых можно предполагать отсутствие снижения активности холинэстеразы. Вот почему мы бы ли вынуждены исследовать несколько видов насильствен ной и ненасильственной смерти и путем сравнения сде лать выводы о нормальных уровнях активности холин эстеразы органов и тканей человека.
Из насильственной смерти нами были взяты случаи смерти от механической асфиксии (преимущественно повышение), различных механических повреждений,элек тротравмы, ожогов тела и пр., а также случаи смер ти от отравлений (главным образом довольно часто встре чающиеся случаи смерти от острого отравления алкого лем). Из ненасильственной смерти мы изучали случаи скоропостижной смерти от заболеваний сердечно-сосу дистой системы (гипертоническая болезнь и атероскле роз) . Активность холинэстеразы органов и тканей иссле довали в день вскрытия трупов (как правило, в пределах 1—2 суток после смерти).
74
Мы исследовали активность холинэстеразы миокарда (основание стенки левого желудочка сердца), легких (краевые отделы), печени, поджелудочной железы, щито видной железы, мышечной ткани (грудная мышца), а также различных отделов центральной нервной системы: коры головного мозга (передняя центральная извилина больших полушарий), головки хвостатого ядра, гипота ламуса (сосковые тела и серый бугор), мозжечка (об ласть зубчатого ядра), продолговатого мозга и спинного мозга (шейный отдел). Активность холинэстеразы опре делялась биохимическим методом Хестрина. Кусочки ор ганов и тканей брали навесками от 100 до 1500 мг и под вергали тщательному растиранию. Затем растертую ткань разводили дистиллированной водой в 5, 10, 15 и 85 раз (в зависимости от уровня холинэстеразной активности органов или тканей). Дальнейшие исследования проводи лись так же, как описано выше.
Мы исследовали активность холинэстеразы органов и тканей от 66 трупов. Ниже приводятся результаты на ших исследований по изучению активности холинэстера зы органов и тканей трупов людей в зависимости от при чины смерти и наличия или отсутствия в организме алко голя (табл. 11) (об этом см. также у В. А. Наумова, 1968).
АКТИВНОСТЬ ХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА, ОПРЕДЕЛЯЕМАЯ В «КУСОЧКЕ НЕРАЗВЕДЕННОЙ ТКАНИ»
В предыдущих разделах были изложены результаты опытов по определению уровня активности холинэстера зы крови, органов и тканей трупов людей, умерших на сильственной и ненасильственной смертью. При иссле довании крови методом Хестрина (с разведением крови) нам не удалось отметить зависимости уровня активности холинэстеразы от наличия или отсутствия алкоголя в ор ганизме. Нри определении активности холинэстеразы ор ганов и тканей тем же методом были получены резуль таты, свидетельствующие, что некоторое снижение актив ности холинэстеразы отмечается в случаях смерти от острого отравления алкоголем, а также в случаях смер ти при наличии алкогольной интоксикации. Однако по лученные результаты являются не вполне статистически
75
достоверными. Поэтому мы решили попробовать иссле довать активность холинэстеразы в «кусочке неразведенной тканп» (Я- С. Смусин, С. А. Астапова и Л. В. Бара нова, 1961). Мы исходили из того, что при-работе мето* дом «неразведенной ткани» алкоголь в тканях не будет разводиться и тем самым будет оказывать угнетающее влияние на активность холинэстеразы.
Мы исследовали активность холинэстеразы коры го ловного мозга трупов людей, умерших от различных при чин, в том числе от острого отравления алкоголем, что имеет очень важное значение в судебно-медицинской практике. Мы обратили также внимание на возможность изменения активности холинэстеразы в зависимости от наличия или отсутствия алкогольной интоксикации, по скольку подобные состояния весьма часто встречаются при судебно-медицинских исследованиях трупов.
Мы произвели исследование активности холинэстера зы коры головного мозга от 134 трупов людей, умерших насильственной и ненасильственной смертью. Во всех случаях производилось качественное и количественное определение алкоголя в головном мозгу и крови.
Для иллюстрации приводим выписку из протокола опыта № 68 от 8 декабря 1958 г.
Гр-н И., 27 лет, скоропостижно скончался 7 декабря 1958 г. Вскрытие произведено на другой день. Судебно-медицинский диагноз: острое отравление алкоголем. Концентрация алкоголя в головном мозгу 3,3%о, в крови — 3,78%о. Взят кусочек коры головного мозга навеской 340 мг, разделен на 4 части и помещен в раствор ацетилхолина в разведении 1 • Ю- 5 , приготовленном на растворе Рингера. Через каждый час производилось тестирование на прямой мышце живота лягушки оставшегося неразрушенным ацетилхолина (табл. 12). С помощью графической интерполяции (рис. 19) мы опре деляли процент разрушения ацетилхолина, затем вычисляли время полураспада ацетилхолина (Т50), а по нему — QChE.
При приливании первой пробы (через 60 минут) разрушилось 15% ацетилхолина. Следовательно, Т50 составит: