- •Имении.М.Сеченоваминздраварф
- •Насоисканиеученойстепеникандидатамедицинскихнаук
- •Глава1.Обзор литературных данных 11
- •Глава2.Материалыиметодыисследования 43
- •Глава3.Результатыисследования 64
- •Глава4.Обсуждениерезультатов 98
- •Списокиспользованныхсокращений
- •ВведениеАктуальностьтемы
- •Цельисследования:
- •Задачиисследования:
- •Научнаяновизна
- •Практическаязначимостьработыивнедрения:
- •Личныйвкладавтора
- •Основныеположения,выносимыеназащиту
- •Апробациядиссертации:
- •1.1.1.ОбщаяхарактеристикаиструктурасистемыAp-1
- •УчастиесистемыAp-1всинтезеинтерлейкинов
- •УчастиесистемыAp-1всинтезеколлагенаIтипа
- •РольтранскрипционныхфакторовАр-1впатогенезезаболеванийкожи
- •Патогенезсклеродермии
- •Сосудистаядисфункция
- •Аутоантителаприсклеродермии
- •Нарушениесинтезаколлагена.Цитокиныихемокины
- •Оксидантныйстресс
- •Клиникаочаговойсклеродермии
- •Фотография1.Бляшечнаяформасклеродермии,эритематозныйочаг
- •Фотография2.Пациенткасбуллезнойформойочаговойсклеродермии
- •Фотография3.Очаговаясклеродермия,генерализованнаяформа
- •Глава2.Материалыиметодыисследования
- •Общаяхарактеристикапациентов
- •Фотография4.Очаговаясклеродермия,бляшечнаяформа,прогрессирую-щаястадия
- •Фотография5.Бляшечнаясклеродермия.Индурациябляшки
- •Фотография6.Вариантгенерализованнойсклеродермииупациентки,от-мечаютсяобширныеочагиколичествомболее4впределах1анатомиче-скойобласти-туловища
- •Фотография7.Вариантгенерализованнойсклеродермииупациентки,от-мечаютсяобширныеочагивпределахнесколькиханатомическихобластей
- •Характеристикаисследуемойгруппыпациентов
- •Общаяхарактеристикаметодатерапии
- •Оценкакачестважизнибольных
- •ОпределениеуровняэкспрессиигеновсемействJun,Fra,FosиAtFврежимереальноговремени Взятиеипервичнаяобработкаисследуемогоматериала.
- •Анализэкспрессиигенов,кодирующихкомпонентовтранскрипционно-гофактораAp1вбиоптатахкожиизочаговсклеродермии.
- •Статистическаяобработкарезультатовисследования.
- •Глава3.Результатыисследования
- •ОсобенностиэкспрессиигеновсистемыAp-1упациентовсочаговойсклеродермией
- •Фотография9.Пациеткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойотмечалосьмаксимальнойснижениеэкспрессиигенаFra-1
- •Фотография10.Пациенткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойотмечалосьдостоверноеувеличениеэкспрессиигенаJunB
- •Фотография11.Пациенткасгенерализованнойформойочаговойсклеродермии,укоторойдостоверноотмечалосьмаксимальноеувеличениеэкспрессиигенаFosb
- •Клиническаяэффективностьнаружнойтерапиипрепаратомтакроли-мус0,1%упациентовсочаговойсклеродермией
- •ДинамикаиндексаактивностиираспространенностипроцессаmLoSsi
- •Изменениепоказателейкачестважизниупациентовочаговойсклеро-дермиейнафоненаружнойтерапии
- •Терапевтическаяэффективностьметодовнаружноголеченияочаговойсклеродермии
- •Глава4.Обсуждениерезультатов
- •Перспективылекарственнойтерапииочаговойсклеродермии
- •Оценкаклиническойэффективностинаружногопримененияпрепара-татакролимус0,1%упациентовсочаговойсклеродермией
- •Практическиерекомендации
- •Списоклитературы
ГОУВПОПЕРВЫЙМОСКОВСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙМЕДИ-ЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ
Имении.М.Сеченоваминздраварф
Направахрукописи
ВавиловВладимирВладимирович
РАЗРАБОТКААЛГОРИТМОВЛЕЧЕНИЯПАЦИЕНТОВСОЧАГОВОЙСКЛЕРОДЕРМИЕЙНАОСНОВАНИИОСОБЕННОСТЕЙЭКСПРЕС-СИИГЕНОВСИСТЕМЫАР-1
14.01.10-Кожныеивенерическиеболезни
ДИССЕРТАЦИЯ
Насоисканиеученойстепеникандидатамедицинскихнаук
Научныйруководитель:доктормедицинскихнаук,
профессорПотекаевН.Н.
Москва–2014
Содержание
Списокиспользованныхсокращений 3
Введение 4
Глава1.Обзор литературных данных 11
ГенытранскрипционныхфакторовAP-1 11
ОбщаяхарактеристикаиструктурасистемыAP-1 11
УчастиесистемыAP-1всинтезеинтерлейкинов 13
УчастиесистемыAP-1всинтезеколлагенаIтипа 14
РольтранскрипционныхфакторовАР-1впатогенезезаболеванийкожи
15
Патогенезсклеродермии 17
Сосудистаядисфункция 17
Аутоантителаприсклеродермии 19
Нарушениесинтезаколлагена.Цитокиныихемокины 22
Оксидантныйстресс 28
1.3.Клиникаочаговойсклеродермии 29
Глава2.Материалыиметодыисследования 43
Общаяхарактеристикапациентов 43
Общаяхарактеристикаметодатерапии 52
ОпределениеуровняэкспрессиигеновсемействJun,Fra,FosиATFвре-жимереальноговремени 58
Глава3.Результатыисследования 64
ОсобенностиэкспрессиигеновсистемыAP-1упациентовсочаговойсклеродермией 64
Клиническаяэффективностьнаружнойтерапиипрепаратомтакролимус
0,1%упациентовсочаговойсклеродермией 83
Глава4.Обсуждениерезультатов 98
Выводы 118
Практическиерекомендации 119
Списокиспользованныхсокращений
TGF-β1-трансформирующийфакторростаβ1AP-1-белокактиватор-1
ATF-активирующийтранскрипционныйфакторMAPK-митогенактивируемаябелковаякиназаJNK-с-JunN-терминальнаякиназа
NFAT-нуклеарныйфакторТ-лимфоцитов
NF-κB-нуклеарныйфакторκB
MMP-матрикснаяметаллопротеиназа
PDGF-тромбоцитарныйфакторроста
mLoSSI-модифицированныйиндекстяжестиочаговойсклеродермии
IL-инерлейкин
bZIP-лейциноваямолнияосновногодоменаCOL1A2-генα-цепейколлагенапервоготипаTIMP-тканевойингибиторметаллопротеиназCTFG-тканевойфакторроста
ВведениеАктуальностьтемы
Склеродермия-хроническоезаболеваниенеизвестнойэтиологии,сопро-вождающеесянарушениямиклеточногоиммунитета,микроциркуляцииипо-вышеннымколлагенообразованием[БаткаевЭ.А.,2004].Насовременномэтапепатогенезсклеродермиирассматриваетсякаксложноевзаимодействиеповре-жденияидисфункцииэндотелиальныхклеток,воспаления,аутоиммунныхре-акцийиактивациифибробластов.Однакопричиныгиперпродукцииколлагенаприсклеродермиивнастоящеевремяостаютсядоконцанеизученными.Ре-зультатымногихисследованийпоказали,чтоключевуюрольвфенотипическихизмененияхприсклеродермиииграеттрансформирующийфакторростаβ[HigleyH.etal.,1994].Вобразцахкожи,полученныхизочаговпораженияпу-тембиопсии,выявленповышенныйсинтезTGF-β1.Такжечеткопоказаноуве-личение числарецепторовкфакторувобластиочаговсклеродермии,чтосвиде-тельствуетоповышеннойактивностиTGF-β1приданнойпатологии[Ihnetal.,2001].Крометоговисследованияхin-vitroбылавыявленакорреляциямеждуувеличениемчисларецепторовкфакторуиповышениемуровняматричнойРНКα-цепейколлагенаIтипа[Kuboetal.,2001].
Дляразработкиподходовкдиагностикеилечениюаутоиммуныхпатоло-гийнеобходимонаходитькритическиезвеньяпатологическогопроцесса.Учи-тываянарушениерегуляциигенетическогоаппаратаутакихпациентов,сэтойцельюперспективнымостаетсяприменениеметодовмолекулярнойбиологиисисследованиемгенов-кандидатовиихбелковыхпродуктов,участвующихвключевыхпатогенетическихмеханизмах.Вкачествегенов-кандидатовпринятовыбиратьтегены,уровеньэкспрессиикоторыхсущественноизменен,атакжететранскрипционныефакторыкоторыевлияютнаэкспрессиюбольшихгруппгенов.
Протеинысемействабелкаактиватора-1(AP-1),связывающиеДНКпромо-терныхучастковгеновирегулирующиеихэкспрессию,играютключевуюрольврегуляциисинтезаколлагенаIтипа,инициируемогоTGF-β.Установлено,что
сегментпромотерагенаколлагенаIтипа,скоторымсвязываетсятранскрипци-онныйфакторAP-1,расположенвпределахучасткасвязыванияTGF-β[Liskaetal.,1990;Slacketal.,1995].Индуцированнаямутацияданногоучасткапромоте-раприводилакпрактическиполнойпотереответанавоздействиетрансформи-рующегофакторароста[Chungetal.,1995].Также,повсейвероятностисистемаAP-1участвуетвпролиферациифибробластовприсклеродермиизасчетизме-нениярегуляцииуровняциклинаE[Shaulianetal.,2001].ТранскрипционныйфакторATF(Activatingtranscriptionfactor)являетсяоднимизобразующихком-понентовтранскрипционногокомплексаAP-1(Activatingprotein1),которыйво-влеченврядважнейшихпроцессоввклетках.Исследованияпоказали,чтоATFучаствуетврегуляцииTGF-β-зависимойэкспрессиигеновсинтезакомпонентовмежклеточногоматрикса,приэтомактивацияATF-2осуществяетсядвумяпу-тями:прямым-путемнепосредственногосвязыванияSmad3ипутемфосфори-лированияTGF-β-активированнойкиназой-1(ТАК-1киназой)[Sanoetal.,1995].КрометогоATF-4являетсяоднимизключевыхфакторов,участвующихвклеточномответенаоксидантныйстресс,составляющийодноиззвеньевпато-генезасклеродермическогопроцесса,путембиосинтезаглутатиона[Rutkowskietal.,2003].
ГеныAP-1задействованыввоспалениииконтролеклеточногоцикла,опо-средованноучаствуютвпроцессахпролиферации,морфогенеза,апоптозаидифференцировкиклеток.МногиеAP-1-зависимыегеныкодируютдругиетранскрипционныефакторы,цитокины,ихрецепторыиферменты,ответствен-ныезаметаболизммежклеточныхсигнальныхмолекул.Данныесвойстваси-стемыAP-1позволилирассмотретьеегенывкачествегенов-кандидатов,участ-вующихвразличныхзаболеванияхкожи,чтобылопродемонстрированоупа-циентовспсориазом[Hessetal.,2004;ПирузянЭ.С.,2007].Придетальномизу-чениисигнальныхпутей,запускаемыхпровоспалительнымицитокинами,быловыявленообщееувеличениеэкспрессиигенов,активирующихсяразличнымипутями,послесвязываниярецепторацитокинаиеголиганда,вчастностиAP-1.Такжеприсравненииэкспрессиигеноввочагахпораженияиобразцахздоро-
войкожибылоустановленоувеличениеэкспрессиис-Fos,c-JunиJunBв10-20развбиоптатахбляшеквсравненииснепораженнымиучасткамикожи[Пиру-зянидр.,2007].УпациентовссистемнымсклерозомбыловыявленоусилениеэкспрессиигеновJunDиFra-2,анокаутированиефибробластовподаннымге-намприводилокрезкомуснижениюсинтезаколлагенанабазовомуровнеинафонестимуляцииTGF-β[Palumboetal.,2011;Reichetal.,2009].
Такимобразом,рассматриваясистемуAP-1каккомпонентрегуляциисин-тезаколлагенанагенномуровне,можносделатьпредположениеоеенепосред-ственномучастиивпатогенезесклеродермическогопроцесса.Всвязисэтимособуюактуальностьприобретаетоценкаэкспрессиигеноввбляшкахупаци-ентовсочаговойсклеродермией.Результатомизучениягенетическихособенно-стейрегуляцииколлагенообразованияможетстатьуглублениепредставленийоформированииипрогрессированиисклеродермиисвозможнымвдальнейшемрасширениемвозможностейегопатогенетическиобоснованноголечения.
ВэтомпланетеоретическиепредпосылкидляпримененияприОСимеют-сяупрепарататакролимус,которыйявляетсямакроциклическимлактоном[Kroftetal.,2009].Такролимусингибируетфосфотазукальцинейрина,MAPки-назыJNKиp38,итакимобразомпрепятствуетзадержкеT-клетоквG0фазезасчетактивацииядерныхтранскрипционныхфакторовNFATиAP-1,вызываяиммуносупрессивныйэффект[Barbarinoetal.,2013].Приэтомвмировойлите-ратуреимеютсялишьединичныесведенияоприменениитакролимусаприле-чениибольныхограниченнойсклеродермией.Всевышеперечисленноеопреде-лилоцельизадачинастоящегоисследования.